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凱杰qiagen 76506 RNAprotect Bacteria Reagent

RNAprotect Bacteria Reagent可在RNA純化步驟前立即穩(wěn)定RNA，從而確?？煽康幕虮磉_和分析數(shù)據(jù)。在細菌培養(yǎng)基中直接加入試劑即可穩(wěn)定革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌。

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GeneChip分析。

使用RNeasy Protect Bacteria Kit（RNeasy Protect Bacteria）從RNAprotect穩(wěn)定的E. coli培養(yǎng)物中分離總RNA，或者使用商品化的沉淀方法（Supplier E_III）從未穩(wěn)定的培養(yǎng)物中分離總RNA。在分離RNA前將RNA聚合酶抑制劑利福平加入到一半的培養(yǎng)物中，以區(qū)分在限定培養(yǎng)條件下的基因表達以及在收集和RNA分離過程中人為基因誘導的作用。加入和未加入利福平時轉錄水平的差異基本上反映出RNA降解的程度。[A] 參照標準的Affymetrix實驗方案對E. coli微陣列進行GeneChip分析。[B] 通過GeneChip分析測得的不同轉錄本數(shù)目除以微陣列中的轉錄本總數(shù)，評估基因表達百分比。（數(shù)據(jù)來自于與Affymetrix合作開展的一項研究。）

RNAprotect Bacteria Reagent防止mRNA降解。

將RNA聚合酶抑制劑利福平加入到E. coli培養(yǎng)物中，停止轉錄，僅監(jiān)測RNA的降解。培養(yǎng)物分為兩半，在其中一半加入RNAprotect Bacteria Reagent。樣本置于室溫0、4、8和16分鐘后離心并分離RNA。采用瓊脂糖凝膠電泳分析獲得的RNA（上圖）。采用northern印跡分析檢查兩半培養(yǎng)物中兩種標記基因的表達。中圖：ompA（半衰期15分鐘）；下圖：α-內酰胺酶（半衰期2–5分鐘）。