亚洲av无码无在线观看红杏,かしこまりました中文在线,国产精品免费一区二区三区视频,老同学3免费完整版在线观看

您好，歡迎進(jìn)入上海力敏實(shí)業(yè)有限公司網(wǎng)站！
一鍵分享網(wǎng)站到：
您現(xiàn)在的位置：首頁 >> 產(chǎn)品中心 >> 生化試劑、抗體、血清 >> 試劑盒 >> 12381EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-質(zhì)粒純化 分子生物試劑

EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-質(zhì)粒純化 分子生物試劑

  • 更新時(shí)間：  2023-07-27
  • 產(chǎn)品型號(hào)：  12381
  • 簡單描述
  • EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-質(zhì)粒純化
    純化得到至多2.5 mg無內(nèi)毒素超轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA

    得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg
    純化流程快，同時(shí)去除內(nèi)毒素
    獲得高產(chǎn)量高拷貝質(zhì)粒DNA
    使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA
詳細(xì)介紹

EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-質(zhì)粒純化


純化得到至多2.5 mg無內(nèi)毒素超轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA

  • 得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg

  • 純化流程快，同時(shí)去除內(nèi)毒素

  • 獲得高產(chǎn)量高拷貝質(zhì)粒DNA

  • 使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kit基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉(zhuǎn)染級(jí)純的應(yīng)用。

質(zhì)粒純化方法與轉(zhuǎn)染效率。

使用兩種方法獨(dú)立制備pRSVcat，分別使用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染到COS-7、HeLa和LMH細(xì)胞中，及使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染至Huh7細(xì)胞中。平均轉(zhuǎn)染效率以相對于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉(zhuǎn)染效率表示。

QIAGEN Plasmid Kit procedures.

Neutralized bacterial lysates are incubated directly in the QIAfilter Cartridge and cleared in seconds by filtration. After the endotoxin removal step, the cleared lysate is then loaded onto the anion-exchange tip where plasmid DNA selectively binds under appropriate low-salt and pH conditions. RNA, proteins, metabolites, and other low-molecular-weight impurities are removed by a medium-salt wash, and ultrapure plasmid DNA is eluted in high-salt buffer. The DNA is concentrated and desalted by isopropanol precipitation and collected by centrifugation.

質(zhì)粒純度與轉(zhuǎn)染效率。

圖中顯示了在無血清條件下，在懸浮液中生長的CHO SSF3 X9細(xì)胞中，質(zhì)粒DNA的數(shù)量和質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率的影響。每個(gè)點(diǎn)代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值；Rel. LU：相對光單位。（數(shù)據(jù)由瑞士巴塞爾諾華公司的M. Zang-Gandor提供。）

細(xì)菌細(xì)胞壁。

大腸桿菌細(xì)胞壁示意圖。

EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-質(zhì)粒純化

性能

EndoFree Plasmid Mega Kit將高效的內(nèi)毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Mega-Giga Cartridge過濾細(xì)菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 2500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。從500 ml–2.5 l培養(yǎng)液中至多純化2.5 mg DNA（培養(yǎng)液體積取決于質(zhì)粒拷貝數(shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質(zhì)。）純化的DNA無內(nèi)毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除細(xì)菌在裂解過程中釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素會(huì)影響原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內(nèi)毒素DNA高度適用于可重復(fù)且結(jié)果可靠的轉(zhuǎn)染。QIAGEN超純無內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究、基因免疫研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制備中的內(nèi)毒素水平*
質(zhì)粒準(zhǔn)備方法內(nèi)毒素(EU?/µg DNA)平均轉(zhuǎn)染效率?
EndoFree Plasmid Kit0.1154%
QIAGEN Plasmid Kit9.3100
2x CsCl2.699%
Silica-gel slurry1230.024%
*宿主菌：大腸桿菌DH5α  質(zhì)粒： pRSVcat.
? 1 ng LPS = 1.8 EU.
? 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計(jì)算 "Plasmid purification method versus transfection efficiency".
無內(nèi)毒素DNA配合原代細(xì)胞得到高轉(zhuǎn)染率*
DNA 純化方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞百分比
EndoFree Plasmid Kit21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進(jìn)行轉(zhuǎn)染。該數(shù)據(jù)是細(xì)胞表達(dá)GFP的百分率，由轉(zhuǎn)染48小時(shí)后綠色熒光細(xì)胞數(shù)量確定。轉(zhuǎn)染效率是每種純化方法制備的超過2個(gè)不同的DNA中6–9個(gè)復(fù)制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew and J. Parente友情提供，Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設(shè)計(jì)的過濾裝置，用于代替細(xì)菌細(xì)胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀，清除細(xì)菌裂解液，相比離心可大量節(jié)約時(shí)間，減少1小時(shí)的質(zhì)粒純化時(shí)間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內(nèi)部真空的方式輕松的澄清大量的細(xì)菌裂解物。

QIAGEN-tips中dute的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當(dāng)。由重力流驅(qū)動(dòng)并持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)的預(yù)裝QIAGEN-tips，限度減少手動(dòng)制備質(zhì)粒所需的時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì)，如benfen，氯仿，溴化乙錠和CsCl，限度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素，又稱脂多糖或LPS，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞膜的組成部分，如大腸桿菌。內(nèi)毒素在質(zhì)粒解裂純化過程中釋放，并顯著地降低內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素與DNA競爭“自由"轉(zhuǎn)染試劑，影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。內(nèi)毒素也誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中非特異性免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂類，如IL -1和前列腺素的合成?？傮w而言，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中是不可控變量，影響結(jié)果的可重復(fù)性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)，干擾研究。

操作流程

在堿性條件下，細(xì)菌細(xì)胞裂解，用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下，質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì)，超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫。DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。

應(yīng)用

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應(yīng)用，包括：

  • 轉(zhuǎn)染，包括原代、敏感和懸浮細(xì)胞

  • 基因治療研究

  • 基因沉默

  • 顯微注射

特點(diǎn)
參數(shù)
ApplicationsTransfection, gene therapy
Culture volume/starting material500 ml – 2.5 liters culture volume
Plasmid typeHigh-copy, low-copy, cosmid DNA
ProcessingManual (vacuum and centrifugation)
Samples per run; throughput1 sample per run
TechnologyAnion-exchange technology
Time per run or prep per run220 min
Yield





留言框

  • 產(chǎn)品：

  • 您的單位：

  • 您的姓名：

  • 聯(lián)系電話：

  • 常用郵箱：

  • 省份：

  • 詳細(xì)地址：

  • 補(bǔ)充說明：

  • 驗(yàn)證碼：

    請輸入計(jì)算結(jié)果（填寫阿拉伯?dāng)?shù)字），如：三加四=7

茄子视频app色版 永久免费| 日本少妇xxx做受| 久久夜色精品国产噜噜亚洲av| 精品九九人人做人人爱| 国产对白嫖老妇搡老太| 国产福利美女福利视频免费看| 高清欧美性猛交xxxx黑人猛交| 久久精品国产99国产电影网| JLZZJLZZ亚洲乱熟无码| 97性无码区免费| 无码人妻丰满熟妇区五十路| 疯狂做受xxxx国产| 国产免费无码一区二区| 欧美黑人又粗又大久久久| 亚洲成a人片在线观看中文| 日本欧美久久久久免费播放网| 果冻传媒av毛片无码蜜桃| 诱人的妺妺2中文在线观看车爱 | 国产探花在线精品一区二区| 少妇人妻偷人精品视蜜桃| 亚洲国产精品无码久久一区二区| 色欲av永久无码精品无码| 亚洲 欧美 中文 日韩| 下载可以看免费视频的软件| 最近中文字幕大全免费版在线| 亚洲国产欧美在线人成| 国产午夜福利视频在线观看| 乌克兰少妇xxxx做受野外| 免费精品人在线二线三线区别| 漂亮人妻洗澡被公强 日日躁| 欧美熟乱第1页| 色窝窝免费一区二区三区| 日本丰满bbwbbw| YY111111少妇影院无码| 蜜臀98精品国产免费观看| 上司人妻互换HD无码中文| 国产精品情侣呻吟对白视频| 亚洲精品日韩一区二区电影| 欧美在线 | 亚洲| 亚洲av无码专区在线观看下载| 少妇又色又紧又爽又刺激视频 |